2
MATERIAL UND METHODEN Teil I
2.1
Tierfang und Hälterung
2.2
Entnahme von Haemolymphe, Gesamthaemocytenzahl, Osmolarität und pH
2.3
Medien und Substrate
2.3.1 Zellkultur-Medien
2.3.2 Spreitungspräparate von Haemocyten
2.3.3 Partikel für Phagocytose und Kapselbildung
2.3.4 Phagocytose in vivo
2.3.5 Knötchenbildung in vitro
2.4
Elektronenmikroskopie Teil II
2.4.1 Fixierungen, Einbettung, Ultradünnschnitt
und Kontrastierung
2.4.2 Elektronenmikroskope
2.5
Färbetechniken für die Lichtmikroskopie
2.5.1 Fluoreszenzmarkierungen
2.5.1.1 Farbstoffe und Konjugate
2.5.1.2 Färbungen mit Fluoreszenzfarbstoffen
2.5.2
Histochemische Methoden
2.5.2.1 Phenoloxidase (PO)
2.5.2.2 Peroxidase (Px)
2.5.2.3 Saure Phosphatase
2.5.2.4 Alkalische Phosphatase (aPh)
2.5.2.5 Unspezifische Esterase
2.5.3
Immuncytochemischer Nachweis von Lysozym in Haemocyte
2.6
Lichtmikroskopie
2.6.1 Lichtmikroskope
2.6.2 Vermessung von Flächenverhältnissen
2.7
Lysishoftest
2.8
Gel-Elektrophorese
2.8.1 Geräte, Stammlösungen und Gelherstellung
2.8.2 Probenvorbereitung, MW-Standards, Elektrophorese
2.9
PO und Px Nachweis in PA-Gelen
2.9.1 Trennung von Plasma- und Haemocyten für die
PAGE
2.10
Lysozymnachweis in PA-Gelen
2.11 Western
Blot
3
ERGEBNISSE
3.1
Die Haemolymphe
3.2
Die Haemocyten von Scolopendra cingulata
3.2.1
Prohaemocyten
3.2.2 Discoide
Haemocyten
3.2.3 Granulocyten
3.2.4
Adipohaemocyten
3.3
Die Haemocyten von Lithobius forficatus
3.4
Enzymaktivitäten
3.4.1 Phenoloxidase
(PO) – histochemische Darstellung
3.4.2 PO in
der PAGE
3.4.3 Peroxidase
(Px) – histochemische Darstellung
3.4.4 Px in
der PAGE
3.4.5 Phosphatasen
und unspezifische Esterase
3.4.6 Nachweis
von Lysozymaktivität in der Haemolymphe
3.4.7
Immuncytochemische Färbung mit Anti-Lysozym-AK
3.4.8 Western
Blot
3.5
Zelluläre Reaktionen auf in vitro-Bedingungen und
Fremdkörper
3.5.1 Exocytose
3.5.2 LPS-Rezeptor?
3.5.3 Pinocytose, Lysosomales Kompartiment
3.5.4 Phagocytoserate von Zymosan in vivo
3.5.5 Phagosom-Lysosom Interaktion
3.6 Ultrastruktur
Untersuchungen der Phagocytose
3.6.1 Phagocytosen bei S. cingulata
3.6.2 Phagocytosen bei L. forficatus
3.7 Aggregation und
Knötchenbildung
3.7.1 Spontane Zellaggregation
3.7.2 Stimulation der
Knötchenbildung – S. cingulata
3.7.3 Knötchenbildung
mit Partikeln – L. forficatus
3.7.4 Zellkontakte, Transfer
von Carboxyfluorescein
4 DISKUSSION
4.1 Gesamthaemocytenzahl, Osmolalität
und pH-Wert
4.2
Haemocyten
4.2.1
Klassifikationen und Definitionen
4.2.2 Prohaemocyten
4.2.3
Plasmatocyte
4.2.4 Discoide
Haemocyte
4.2.5
Granulocyten
4.2.6
Sphaerulocyte
4.2.7
Coagulocyten?
4.2.8
'Adipohaemocyte'
4.3
Enzyme der Haemocyten
4.3.1 Phenoloxidase (PO) — Peroxidase (Px)
4.3.2 Lysozym
4.3.2.1 Western Blot
4.4
Exocytose, Degranulation und Koagulation der Haemolymphe
4.5
Pinocytose, Lysosomales Kompartiment
4.6
Phagocytosen
4.7
Aggregation und Knötchenbildung
4.7.1 Spontane Aggregation der Haemocyten
in vitro
4.7.2 Stimulierte
Aggregation und 'Kohäsion' der Haemocyten
4.7.3
CFDA-Markierung
5
ZUSAMMENFASSUNG
6
ANHANG
6.1
Chemikalienliste
6.2
Abkürzungen
6.3
Formeln
7
LITERATUR